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酶联免疫的原则

日期:2022-07-06 01:56
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摘要:
 
酶联免疫其具有特异、灵敏、简便、快速的特点,现已在生物医学研究领域及临床疾病的诊疗中得到了广泛的应用。
EIA本身是以酶[辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等]作标记物的,因此,EIA的测定放大始终是围绕着标记酶来作文章的,不外乎三种可能的方式:①增加标记酶的量;②非显色底物的应用;③附加一个受标记酶催化的反应系统。

一、增加标记酶的量
通过生物素/亲合素—酶或酶/抗酶复合物的间接方法,可以增加ELISA测定中*后所测定的标记酶的量。这种方法虽在一定程度上由于标记酶的聚集增加了EIA的测定敏感性,但同时有增加非特异的背景显色的可能。

二、非显色底物的应用
从酶的反应底物着手,使用具有高测定敏感性的非显色底物如荧光素或发光物,从而提高EIA的测定敏感性,这种方法的优点是不需额外的步骤及试剂制备,缺点是需要特殊的测定仪器。

三、附加一个受标记酶催化的反应系统
原始标记酶催化附加一个反应系统,如酶底物反应循环或酶级联反应,从而达到反应放大的目的。这种由数个催化反应的耦联而构建的放大系统,是酶放大的根本之所在,敏感性的提高来源于真正的信号放大,而不是简单地将一个分子转变为更多的易于测定的分子。一个适用的酶放大系统的选择除了要考虑生化因素外,重要的是酶及其底物的稳定性,并要易于获得,因其对试验的准确性和重复性有较大的影响。




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